聚合物基質(zhì)色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類,尺寸規(guī)格也不同:①常規(guī)分析柱(常量柱),內(nèi)徑2~5mm(常用4.6mm,國內(nèi)有4mm和5mm),柱長10~30cm;②窄徑柱(narrow bore,又稱細管徑柱、半微柱semi-microcolumn),內(nèi)徑1~2mm,柱長10~20cm;③毛細管柱(又稱微柱microcolumn),內(nèi)徑0.2~0.5mm;④半制備柱,內(nèi)徑>5mm;⑤實驗室制備柱,內(nèi)徑20~40mm,柱長10~30cm;⑥生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達幾十厘米。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定,目的是為了避免管壁效應(yīng)。
聚合物基質(zhì)色譜柱流動相流速的選擇:
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求柱效,使用流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。當選用流速時,分析時間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
濕法省事,一般用淋洗劑溶解樣品,也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等。但溶劑越少越好,不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上柱前是粘乎乎的,一般沒關(guān)系??墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會析出,這一般都是比較大量的樣品才會出現(xiàn),是因為硅膠對樣品的吸附飽和,而樣品本身又是比較好的固體才會發(fā)生,這就應(yīng)該先重結(jié)晶,得到大部分的產(chǎn)品后再柱分,如果不能重結(jié)晶那就不管它了,直接過就是了,樣品隨著淋洗劑流動會溶解的。
使用中,應(yīng)注意柱溫的選擇,因為柱溫關(guān)系到:
1、色譜柱固定液的壽命。若柱溫高于固定液的使用溫度,則會造成固定液隨載氣流失,不但影響柱的壽命,而且固定液隨載氣進入檢測器,將污染檢測器,影響分析結(jié)果。
2、分離效能和分析時間。若柱溫過高了,會使各組分的分配系數(shù)K值變小,分離度減??;但柱溫過低,傳質(zhì)速率顯著降低,柱效能下降,而且會延長分析時間。
3、化合物保留時間。柱溫越高,出峰越快,保留時間變小。柱溫變化會造成保留時間的重現(xiàn)性不好,從而影響樣品組分的定性結(jié)果。一般柱溫變化1℃,組分的保留時間變化5%;如果柱溫度變化5%,則組分的保留時間變化20%;
4、色譜峰峰形。柱溫升高,正常情況下會導(dǎo)致半峰寬變窄,峰高變高,峰面積不變。但是組分峰高變高,以峰高進行定量時時分析結(jié)果可能產(chǎn)生變化;反之柱溫降低,則相反。
有些樣品溶解性差,能溶解的溶劑又不能上柱(比如,DMF,DMSO 等,會隨著溶劑一起走,顯色是一個很長的脫尾),這時就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說法是 1:1,我覺得是越少越好,但是要保證在旋干后,不能看到明顯的固體顆粒(那說明有的樣品沒有吸附在硅膠上)。