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??步：搖瓶機復(fù)蘇：根據(jù)所培養(yǎng)的細菌選擇適宜的培養(yǎng)基，大部分細菌在LB培養(yǎng)基中在超凈工作臺先用1毫升左右的適宜的培養(yǎng)基溶解冷凍菌，然后轉(zhuǎn)移到10毫升中試管（放入4毫升液體培養(yǎng)基）中，一般在37攝氏度搖床靜止或低轉(zhuǎn)速培養(yǎng)12小時或者過夜（溫度取決于所培養(yǎng)的細菌適宜生長的溫度）。?

在進行搖瓶機試驗前，首先檢查搖瓶機各部件，檢查氣源、電源、管路、壓力表、密封等是否正常，特別強調(diào)的是搖瓶機做為精度，高科技的儀器，搖瓶機每個過程都由精準(zhǔn)的程序控制，所以要求實驗人員在操作前必須對搖瓶機的各個按鈕，流程熟練掌握，詳細閱讀搖瓶機說明書，及實驗室儀器安全操作規(guī)程。掌握了搖瓶機的基本操作要領(lǐng)后，逐步按以下步驟進行搖瓶機細菌培養(yǎng)試驗：

??第二步：搖瓶機平板劃線培養(yǎng)：在平板（瓊脂+液體培養(yǎng)基）劃線，放37攝氏度培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)6小時~12小時，在平板上觀察是否形成了單菌落.

??第三步：搖瓶機挑單菌落：在超凈臺中挑選典型單菌落，置入10毫升中試管（內(nèi)有5毫升液體培養(yǎng)基）中，在37攝氏度搖床，轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)培養(yǎng)12小時或者過夜，肉眼能看到試管渾濁。

??第四步：搖瓶機按照1：20的比例將中試管中的菌液移到250毫升三角瓶（放入100毫升液體培養(yǎng)基），，培養(yǎng)條件同前。注意：所有的接種操作均需要在層流罩中，培養(yǎng)基應(yīng)無菌。

以上四步，搖瓶機是一般細菌培養(yǎng)都會涉及到的步驟，有些操作人員在實際搖瓶機試驗過程中有時會省略復(fù)蘇這一環(huán)節(jié)，直接拿燒熱的接種環(huán)挑些菌液冰水，在平板上劃線培養(yǎng)，等長出菌落后，選取合適的菌落搖瓶機培養(yǎng)。另外，要提醒大家的是：（1）搖瓶機是搖轉(zhuǎn)方式進行混合攪拌，而發(fā)酵罐是直接機械攪拌;（2）搖瓶機發(fā)酵罐可以取樣或者儀表時時檢測，但是搖瓶機因為量小不能方便的進行控制和檢測。

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